小鼠黑色素瘤細(xì)胞
貨號KL-008
簡稱 B16
細(xì)胞數(shù) 1×106
規(guī)格 1ml/T25
價格 詢價
注意事項：
1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要**后方能丟棄。
詳細(xì)描述 Description
小鼠黑色素瘤細(xì)胞細(xì)胞特性
來源：小鼠黑色素瘤
形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長
含量：>1x106 個/mL
污染：支原體、**、酵母和**檢測為陰性
規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存：使用T25瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，請先在顯微鏡下檢查細(xì)胞生長狀態(tài)，并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后，再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，可按照以下細(xì)胞培養(yǎng)步驟進行細(xì)胞后續(xù)處理操作。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
小鼠黑色素瘤細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；上等胎牛血清，10%。
培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：小鼠黑色素瘤細(xì)胞將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：小鼠黑色素瘤細(xì)胞待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
